這方面的實驗與應(yīng)用，多見于國外報道。目前國內(nèi)采用不多。下面我們了解一下水蛭素提取方法。
1．提取水蛭素的有效部位
水蛭素主要產(chǎn)生于水蛭的唾液里，當(dāng)水蛭吸血時，將其分泌出來，阻止血液凝固。因而，實踐表明，提取水蛭素的最佳部位在頭部。i．p．baskova在比較了從水蛭頭部、去頭后的體部及整體水蛭中提取的水蛭素后發(fā)現(xiàn)，從頭部得到的水蛭素活性最強(qiáng)，從整體得到的活性只有頭部的一部分，而從去頭后的體部得到的是偽水蛭素，其化學(xué)性與水蛭素相同，但無抗凝活性。
2．提取水蛭素的方法
(1)用能與水混溶的有機(jī)溶劑提取：從水蛭頭部提取：即將水蛭頭部剪下，切成碎片，以其10倍體積的40％丙酮一水提取2次，每次30min。合并提取液，再加1／2體積的809《丙酮一水，加冰醋酸調(diào)至ph4．3—4．5，離心除去沉淀，上清液用氨水調(diào)至ph6．0，在40℃下，減壓濃縮至原體積的l／10。再用10％三氯醋酸調(diào)至ph1.8。最后以10倍體積的冷丙酮(—5℃一0℃)將粗水蛭素沉淀析出。
從水蛭整體中提取：即將80％的冷丙酮加到磨碎的水蛭粉中，攪拌10min后，加氯化鈉(0．2—0．5mol幾)和三氯醋酸(0．1—0．4mol／l)，使ph值達(dá)到2．5—3．5，攪拌30—60min，傾出上清液，沉渣再用1／3體積的上述80％丙酮提取1次。合并2次提取液，加入2倍體積的冷丙酮(—10~c)，沉淀析出粗水蛭素。
(2)用水提取：
將水蛭磨成細(xì)粉，加入0．5mol幾氯化鈉液，室溫攪拌30—60min，調(diào)成ph2．0—2．5后，升溫至70'c，攪拌15min離心去渣。上清液調(diào)至ph6.5—7．0，加入l.5倍體積的乙醇，去沉淀。上清液在30℃一40℃，真空濃縮至原體積的1／20左右。向濃縮液中加入等體積的丙酮，去沉淀，再加入4倍體積的冷丙酮(—5℃一0℃)，將粗水蛭素沉淀析出。水蛭素的分離，多用離子交換、凝膠層析和等聚焦等方法。如作進(jìn)一步研究，可以分離提到純晶。
